(1)液体菌种制作
液体菌种要求无污染,菌龄短,感染力强,优质高产。
①培养液配制 玉米粉2%,葡萄糖2%,蛋白胨1%,酵母粉0.5%,磷酸二氢钾0.1%,硫酸镁0.05%,pH6.5~7.0。玉米粉加水煮沸10分钟,过滤取滤液,加入其他成分,调整pH。
②培养方法
摇瓶培养:将培养液分装入500毫升锥形瓶内,每瓶100~150毫升,0.103兆帕、121℃保持30分钟灭菌,冷却后在无菌条件下接入斜面菌种一小块,安放在摇瓶机上,控温23±2℃,每分钟180转,偏心距4厘米,振动培养。或往返式摇床,96~106次/分钟,振幅6~7厘米。一般培养96小时,菌液为棕色,有虫体浓郁味即可用于感染蚕蛹。
通气培养:即深层培养或液体发酵。作为制种,可自己制作安装小容量发酵装置。主要器材为小气量电磁泵、空气滤球、导管(直径6~8毫米玻璃管或不锈钢管)、容器(锥形瓶或蘑菇瓶)、白橡皮塞、直径6~8毫米乳胶管等。
安装时将电磁泵挂在壁上,高度超过发酵容器,滤球用细铁丝装入普通棉花,松紧适中,玻璃导管用酒精灯火焰弯制成一定角度。进气管长度近达瓶底,先端在火焰上拉尖细。橡皮塞大小与瓶口匹配并用台钻打2个与玻璃管粗细相同的孔洞。最后用乳胶管把电磁泵、导管、容器等互相紧密连接。使用时容器内装入培养液,装量为容量的70%左右,封好橡皮塞,滤球口和瓶塞用二层报纸包扎。除电磁泵外,整个装置放入灭菌锅内常规灭菌,冷却后在无菌条件下接入斜面刮制成的菌悬液或斜面菌丝体。控温23±2℃,接通电源,电磁泵做功产气,气流通过滤球得到洁净无菌空气,经进气管进入第一瓶培养液内,多余气体压入第二、第三瓶内,连续进行通气培养,经96小时培养即可作为菌种。
(2)床畦要求
床栽在室内设多层床架,每层四周用竹片或木板做挡板,床宽60厘米,层距40厘米。床上铺一层薄稻草,其上放5~7厘米厚的培养土(林下沙壤土60%,菜园腐殖土30%,发酵杂木屑10%,pH6.5,含水量50%~60%)。室外畦栽,选择土质疏松、不积水、有水源,能避免人畜进入的场所。畦宽100~120厘米,栽培前在畦底铺6厘米厚的沙壤土或培养土,外搭荫棚。
(3)排蛹接种
将家蚕蛹或柞蚕蛹均匀排放在床畦土层上,蛹间距离2厘米左右。将新鲜的液体菌种稀释5~8倍,装入喷雾器内,喷洒蛹体上。为增加感染度,1天内分2次喷。然后,覆沙壤土3~5厘米,上覆地膜或树叶保湿。
(4)管理要点
控温23±2℃,空气相对湿度60%~70%,遮光培养,促菌丝感染和生长繁殖;约经40天菌丝长满蛹体,子座将发生时,除去地膜及覆盖物,增加漫射光,控温20℃左右,空气相对湿度提高至90%左右,细雾常喷,保持表土潮湿。经上述处理,菌丝扭结成米粒状原基并逐渐发育生长成子座。
除床畦栽培外,蚕蛹培养北虫草也可采用罐头瓶培养。其方法是:蛹经酒精表面消毒和无菌水反复冲洗后,直接放入长好菌丝的米饭培养基的罐头瓶内,覆扎薄膜,控制适宜条件使之长出子座,也可在消毒的蛹体环节间膜处注入菌液或蛹体表面涂布菌悬液放入罐头瓶内培养。